分子量一般指相對分子質量，分子量是有機化合物基本的理化性質參數，分子量正確與否往往代表著所測定的有機化合物及生物分子的結構正確與否,因此也是產品報批的重要數據之一。

蛋白或多肽藥物具有結構復雜且高度非均一性的特點，其開發和生產過程復雜，面臨很多不可控因素，為了確保產品安全有效，必須進行多方面的表征。準確的氨基酸序列、分子量、價態變化、糖基化、聚集水平以及氧化水平都是蛋白質藥物表征的關鍵要素。例如：單克隆抗體被認為是具有高度特異性的靶向藥物，其對腫瘤細胞的靶向性非常高?？贵w-藥物偶聯物（Antibody-drug conjugates，以下簡稱 ADCs）技術，就是在抗體蛋白的特定氨基酸上偶聯具有抗腫瘤作用的高效應化療藥物（或稱小分子藥物），以增加單克隆抗體的療效、并降低小分子藥物的毒性。相比單克隆抗體，ADCs 藥物的生產工藝更為復雜，因此為了保證 ADCs 藥物的安全性和有效性，需對 ADCs 藥物的質量進行監控。藥物抗體比（drug to antibody ratio，以下簡稱DAR）是評價 ADCs 藥物的生產工藝和產品質量的一個重要參數。其中MS檢測方法因其快速、靈敏度比較高和較強的定性功能等優點，愈來愈廣泛地被用于測定 ADCs 的 DAR。

隨著非變性質譜（Native MS）技術的不斷發展和推廣，采用非變性質譜進行cysteinelinked ADCs分析顯示了較強的應用潛力。Thermo Scientific^TM Exactive^TM Plus EMR 質譜儀保持了Orbitrap 較高分辨率、較高質量精度的優勢，分辨率高達140,000 FWHM，能夠實現同分異構體的分離和糖基化狀態的測定，同時擴展質量數范圍至 m/z 20,000，實現了較大蛋白質、抗體、抗體-藥物偶聯物、糖型和蛋白質組裝的分析，適用于測定蛋白和蛋白復合物在天然結構狀態下的分子量。

高分辨質譜法（EMR）分子量檢測方法

• 儀器：Exactive Plus EMR 質譜

• 數據處理軟件：ProteinDeconvolution（v4）

結果展示

表 1 送檢樣品分子量 LC-MS 檢測結果

樣本的TIC圖

樣本XXX的相對分子質量圖

樣品要求：蛋白純度>95%；蛋白質量>100 μg，濃度0.5μg/μL以上。