分子間互作尤其是蛋白-蛋白互作（PPI）始終是深入探究細胞信號通路的重難點。

利用LC-MS/MS蛋白鑒定技術對IP、co-IP、pull-down等純化溶液樣本進行蛋白鑒定，得到與目標蛋白相互作用的一系列蛋白質再通過后續檢測方法驗證目標蛋白的互作蛋白是目前行之有效的策略之一。

co-IP-MS案例解析

MGMT激活DUB3可穩定MCL1并促進卵巢癌化學耐藥

MGMT-activated DUB3 stabilizes MCL1 and drives chemoresistance in ovarian cancer

研究對象：卵巢癌期刊：PNAS

影響因子：9.412發表單位：中國醫學科學院分子腫瘤學國家重點實驗室

研究背景

泛素化，這是一主要負責調節修飾蛋白穩定性和活性的翻譯后修飾，參與幾乎所有生物過程的調控， 并與腫瘤的發生和發展有關。相反，去泛素化酶(DUBs)可以從底物蛋白中切割泛素，編輯泛素鏈，并處理泛素前體以抵消泛素化過程。

BCL-2家族編碼20多種蛋白質，包括調節內在凋亡途徑的促凋亡蛋白和抗凋亡蛋白，維持細胞存活和細胞死亡之間的平衡。MCL1由于其半衰期短，不同于其他BCL-2家族成員，調控細胞存活或凋亡狀態轉變應對各種應激。在卵巢癌中USP9X和USP1 3在泛素化實驗中均不能完全裂解MCL1上的泛素鏈，提示可能存在其他對M CL1去泛素化必不可少的去泛素化酶。青蓮百奧完成了驗證去泛素化酶3(DUB3)與卵巢癌細胞的細胞質中的MCL1相互作用IP-MS實驗中的質譜鑒定工作。

結果速遞：

1.研究人員利用文庫篩選的方法，在人胚胎腎細胞中探究66 個去泛素化酶對MCL1 的調控作用。最終發現，DUB3 能夠顯著上調MCL1 蛋白水平，是穩定MCL1 的最主要的去泛素酶。在9 株卵巢癌細胞系中，DUB3 與MCL1 的表達水平也有顯著的相關性。

2.為了解決臨床問題，研究人員想要找到一種合適的抑制劑。在分別實驗了30 多種目前已被臨床證明有效的抑制劑對DUB3 的調控作用后，他們發現，Patrin-2 對DUB3 的高表達有抑制作用。而Patrin-2 已被證實是甲基轉移酶MGMT 的抑制劑。

Patrin-2抑制DUB3的表達

3. 過 表 達 MGMT 能 夠 顯 著 提 高 DUB3 的 mRNA水平， 同時經過9株卵巢癌細胞系實驗驗證，也發現MGMT的蛋白水平和DUB3的mRNA水平存在明顯的正相關關系， 這說明MGMT轉錄激6-甲基鳥嘌呤DNA甲基轉移酶（MGMT）是DUB3轉錄的關鍵激活因子，并且MGMT抑制劑PaTrin-2在體外和體內均有效抑制具有升高的MGMT-DUB3-MCL1表達的卵巢癌細胞； 組蛋白去乙?；敢种苿?/span>（HDACis）可以顯著激活MGMT / DUB3的表達;HDACis和PaTrin-2的聯合小鼠給藥取得理想的治療效果。最終揭示了MGMT-DUB3-MCL1軸在卵巢癌化療耐藥中的重要作用，并提供了一種克服卵巢癌化療耐藥的有效治療方法：HDACis和PaTrin-2聯合治療。

MGMT轉錄激活DUB3

參考文獻

Xiaowei Wu, Qingyu Luo, et al. MGMT-activated DUB3 stabilizes MCL1 and drives chemoresistance in ovarian cancer.PNAS. 2019;doi:10.1073/pnas.1814742116.